[摘要] 目的 探讨外阴上皮内瘤变（VIN）中人乳头状瘤病毒（HPV）高危型、低危型的感染情况，以及HPV各亚型在VIN病理中的分布情况、各亚型与VIN分级有无相关性。 方法 以人乳头瘤病毒核酸扩增法分型检测各亚型HPV在100例VIN患者及100例外阴正常皮肤组织中的表达情况，并行统计分析。 结果 VIN组织HPV感染率远高于正常组织（χ2=45.54，P < 0.05）；随VIN级别增高，HPV感染率有增高趋势（χ2=8.45，P < 0.05），高危型HPV感染亦有增高趋势（χ2=6.25，P < 0.05）；各级别VIN两两比较，高危型、低危型HPV感染构成比均显著不同（均P < 0.05）。三种类型VIN组织中高危型、低危型HPV感染构成比显著不同（χ2=13.24，P < 0.05），各级别两两比较，VINⅠ组和VINⅡ组、VINⅢ组高危型HPV感染亚型分布均显著不同（均P < 0.05），VINⅡ组和VINⅢ组高危型HPV感染亚型分布比较差异均无统计学差异（χ2=1.52，P > 0.05）。VINⅠ中以HPV58感染为主，VINⅡ、VINⅢ中均以HPV16、HPV18感染为主。经Sperman等级相关分析，HPV16/18感染与VIN等级有相关性（r = 0.65，P < 0.05）。 结论 HPV感染与VIN发生、发展可能有关系，HPV感染型别在不同级别VIN中有显著差异，HPV16/18可能与VIN的进展有联系，治疗HPV感染可能预防VIN。
[关键词] 外阴上皮内瘤变；人乳头状瘤病毒；高危型；低危型；聚合酶链式反应
[中图分类号] R737.35 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）02（a）-0044-03
Related clinical research between vaginal intraepithelial neoplasia and HPV infection type
WU Ping
Gongming People"s Hospital of Guangming New District, Guangdong Province, Shenzhen518106, China
[Abstract] Objective To investigate the infect conditions of high-risk type and low-risk type human papilloma virus (HPV) in vaginal intraepithelial neoplasia, each subtype of HPV distribution in the VIN pathology, and whether there being relativity between each subtype and VIN grading. Methods Took 100 VIN patients and 100 normal people, detected the expression with papilloma virus nucleic acid amplification method on their vulvar skin tissues, and then made a statistic analysis. Results The HPV infect rate of VIN tissues was much higher than normal tissues (χ2=45.54, P < 0.05); an increasing trend of HPV infection rate (χ2=8.45, P < 0.05) and high-risk type HPV infection (χ2=6.25, P < 0.05) had been found accompanied with the VIN level; and there had been a notable difference between the infect proportion of the high-risk type HPV and Low-risk HPV by making comparisons between the VIN at different levels. Notable difference of the infect proportion of the high-risk type HPV and Low-risk HPV had been found in each level VIN (χ2=13.24, P < 0.05). By having made comparisons between different levels, notable different distribution of high-risk type HPV infection subtype had been found among VINⅠ, VINⅡ and VINⅢ, and no statistic distributed difference had been found between VINⅡ HPV infect subtype and VINⅢ HPV infect subtype (χ2=1.52, P > 0.05). It had been proved that there mainly existed HPV58 infection in VINⅠ; there mainly existed HPV16 infection and HPV18 infection in VINⅡ and VINⅢ,. And relativity had been found between HPV16/18 infection and VIN level by having Sperman grading correlation analysis (r = 0.65, P < 0.05). Conclusion It maybe have relation between infection of HPV and occurrence and development of VIN, HPV infect subtype has statistic difference in different grade of VIN, HPV16/18 may have relation with development of VIN, treatment of HPV infection can prevent VIN.
[Key words] Vaginal intraepithelial neoplasia; HPV; High-fisk type; Polymerase chain reaction
外阴上皮内瘤变（VIN）的发病原因目前还不完全清楚，可能与人乳头状瘤病毒（HPV）感染有关[1]，本文旨在分析HPV感染与外阴上皮内瘤变之间的关系，为通过预防和治疗HPV感染以降低VIN及外阴肿瘤发病率提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
所有VIN患者均为2008年1月~2011年6月以病理确诊并由病理分析，共100例，其中，VINⅠ32例，VINⅡ34例，VINⅢ34例，平均年龄（32.4±4.3）岁，另取100例正常及非特异性炎症外阴皮肤组织为对照，平均年龄（33.1±4.1）岁。
1.2 检测方法
所有参与者检查均于非经期进行，检查前3 d内禁阴道冲洗和使用阴道内药物，24 h内无性行为。用PCR+膜杂交法检测HPV，使用的HPV分型检测试剂盒购自潮州凯普生物化学有限公司，试验步骤严格按照试剂盒说明书进行。此试剂可对21种HPV基因型（6、11、42、43、44、16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304）进行分型检测。
1.3 结果判定
检测结果阳性点为清晰荧光下可见蓝紫色的圆点。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0软件包分析数据，本研究中均为计数资料，比较用c2检验、校正c2检验或Fisher精确概率法，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 组织学类型
VIN组织学类型包括“基底细胞型”和“湿疣样型”。基底细胞型共64例，镜下由较小而致密的非典型性基底细胞样细胞组成，从基底层延伸至表面，表面平滑，核质比例高，核深染，具有多形性，非典型性核分裂象随着VIN级别的升高逐渐增多，表层细胞大多可见到不典型挖空细胞，见图1a~b。“湿疣样型”共36例，镜下呈疣状、乳头状生长伴角化不全，细胞核大小不一有异型性，可见到多核细胞、瘤巨细胞及细胞内角化，可见到较多核分裂相及典型的挖空细胞，见图1c~d。
图1外阴上皮内瘤变镜下组织染色（苏木精-伊红染色，4×100）
2.2 正常外阴组织和各级别外阴上皮内瘤变组织高危型、低危型HPV感染情况比较
经统计，VIN组织HPV感染率远高于正常组织（χ2=45.54，P < 0.05）；随VIN级别增高，HPV感染率有增高趋势（χ2=8.45，P < 0.05），随VIN级别增高，高危型HPV感染亦有增高趋势（χ2=6.25，P < 0.05）；三种类型VIN组织中高危型、低危型HPV感染构成比显著不同（χ2=13.24，P < 0.05），各级别两两比较，高危型、低危型HPV感染构成比均显著不同（VINⅠvs VINⅡ，χ2=6.21，P < 0.05；VINⅡvs VINⅢ，χ2= 6.32，P < 0.05 ；VINⅠ vs VINⅢ，χ2=6.18，P < 0.05）。具体正常外阴组织和各级别外阴上皮内瘤变（VIN）组织高危型、低危型HPV感染情况比较见表1。
2.3 各种高危型HPV在各级别VIN中分布
经统计，各种高危型HPV在各级别VIN中分布有差异（χ2=13.24，P < 0.05），各级别两两比较，VINⅠ组和VINⅡ组、VINⅢ组高危型HPV感染亚型分布均不同（VINⅠvs VINⅡ，χ2=6.64，P < 0.05；VINⅠvs VINⅢ，χ2=6.58，P < 0.05）VINⅡ组和VINⅢ组高危型HPV感染亚型分布差异无统计学意义（χ2=1.52，P > 0.05）。VINⅠ中以HPV58感染为主，VINⅡ、VINⅢ中均以HPV16、HPV18感染为主，HPV31、HPV33感染于各级别VIN中也较为常见，具体各亚型HPV分布见表2。经Sperman等级相关分析，HPV16/18感染与VIN等级有相关性（r = 0.65，P < 0.05）。
表2 各种高危型HPV在各级别VIN中分布[n（%）]
3 讨论
3.1 VIN与HPV感染
VIN的病理学类型包括疣型、基底细胞型及混合型。近年来VIN发病率有增加趋势，患者年龄趋于年轻化。作为外阴癌的癌前病变，VIN的病因目前尚未完全明了，包括有HPV感染、免疫抑制、外阴性传播疾病、肛门-生殖器官瘤变等[1-3]。感染HPV的细胞病理学变化包括病毒蛋白围绕核周形成晕环、细胞膜融合增厚等。过去的研究中发现，约80%的VIN伴有HPV感染[4]，故HPV感染与VIN的关系得到越来越多学者的重视。本研究中82%VIN患者有HPV感染，远高于正常外因组织（χ2=45.54，P < 0.05），与既往研究结果相当。一般认为，正常的外阴组织为复层鳞状上皮，不易受HPV侵袭且暴露面广，容易治疗[5-6]。但一旦发生上皮内瘤变，即不易再清除HPV，易导致二重甚至多重感染。因此外阴上皮内瘤变可能是一个以HPV感染为主、多因素作用、多步骤的过程，HPV感染可能既是始发因素之一，又是继发加重、进展的重要原因。研究各型HPV感染与VIN的关系，既是深入了解HPV感染与VIN发生的必需，又是进一步诊断、治疗的重要参考。
3.2 各级别VIN与HPV感染型的相关性
如今发现和鉴定的HPV有不少于200个亚型，其中54个亚型可感染生殖道，其分类依据是DNA的同源性，如某种HPV DNA序列与已知HPV同源小于90%，则可认为是新型HPV。不同型HPV感染所致临床病变不同。根据其致病性可分为高危型HPV和低危型HPV。低危型包括6、11、40、42、43、44、53、54、57、61、62、72等，高危型则有16、18、26、31、33、35、45、51、52、55、56、58、59等[4]。本研究发现，随VIN级别增高， HPV感染率有增高趋势（χ2=8.45，P < 0.05），在VINⅢ中HPV的感染率达到95%左右，而且高危型HPV感染亦有增高趋势（χ2=6.25，P < 0.05），三种类型VIN组织中高危型、低危型HPV感染构成比显著不同，显示HPV与分化差的上皮内瘤变关系更为密切，尤其是高危型HPV可能参与了VIN的发生和发展过程。进一步统计发现，VINⅠ的HPV感染以HPV58型为主，HPV16/18型在VINⅡ和VINⅢ中更为常见，表明不同VIN的不同阶段可能有不同型的HPV发挥主要作用。不同阶段为何有不同型的HPV起作用，原因仍不明确，可能为不同病变的外阴组织对不同型别HPV的易感性不一，或者不同型HPV对不同病变的侵袭能力不同，具体进一步研究有赖于分子生物学的进展。另外重要的一点是，HPV16/18显示出与各级别VIN的相关性。分子生物学研究表明，HPV16和HPV18各自含E6和E7基因，分别编码病毒复制所需蛋白质。E6蛋白可结合p53基因并通过泛素降解使该抑癌基因失活。E7蛋白则可竞争性结合抑癌基因PRb，使其磷酸化失活，干扰蛋白质功能而导致细胞功能障碍，基因组失稳，扩展率激增，引起细胞恶性转化。HPV感染后可以整合至宿主细胞中，导致持续反复HPV感染而导致宫颈细胞恶性表型转化[7]。而对同为生殖器官组织的外阴组织，尽管组织学类型不同，HPV16/18有可能发挥了相同或相似的生化作用，导致了外阴组织的恶性表型转化。对进一步微观研究VIN发生机制而言，HPV16/18可能是较好的切入点。
[参考文献]
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（收稿日期：2011-11-22 本文编辑：郝明明）