[摘要] 目的 通过测定血中3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性，探讨GAPD在糖尿病肾病早期诊断中的意义。 方法 测定190例健康者和80例2型糖尿病患者的血GAPD，尿微量白蛋白和β2-微球蛋白，对结果进行统计分析。 结果 疾病组中GAPD活性水平均高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。疾病组中的微量白蛋白尿组、大量白蛋白尿组中的微量白蛋白和β2-微球蛋白高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。但是正常白蛋白尿组中的微量白蛋白和β2-微球蛋白与对照组相比差异无统计学意（P>0.05）。 结论 GAPD在正常白蛋白尿期活性已经发生变化，比微量白蛋白和β2-微球蛋白活性变化更早，能够提早预测糖尿病肾脏疾病的发生，有利于临床做出诊断，改善患者的预后。
[关键词] 3-磷酸甘油醛脱氢酶；2型糖尿病；微量白蛋白；β2-微球蛋白
[中图分类号] R587.1 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2012）22-116-03
Diagnositic value of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase determination in diabetes nephropathy
ZHANG Yibing SHI Juan ZHANG Shuqin
Department of Center Clinical Laboratory， the Third Affiliated Hospital of Liaoning Medical College， Jinzhou 121000， China
[Abstract] Objective To explore the significance of GAPD in diabetic nephropathy through determining the activity of blood GAPD. Methods To analyze the determined results of 190 healthy and 80 patients of type 2 diabetes patients， the activity of GAPD， microalbuminuria and β2-micro- globulin. Results Activity of GAPD in three disease group were higher than the normal group （P<0.05）. mALB and β2-M in two disease group of the abnormal microalbuminuria group were higher than the control group （P<0.05）， but compared with the control group mALB and β2-M in normal albuminuria group had no significant difference （P>0.05）.GAPD in disease group had no difference （P>0.05）. mALB and β2-M meaningful were differences between the three groups （P<0.05） . Conclusion Activity of GAPD has been changed in normal proteinuria and earlier than mALB and β2-M.It can be forecast early diabetic kidney disease， easy to make a diagnosis for clinic and improve the prognosis of patients.
[Key words] Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase； Type 2 diabetic； Albumin； β2-micro-globulin
糖尿病（diabetes mellitus，DM）可以使体内的多个脏器受累，糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）就是糖尿病的最主要的慢性并发症之一，也是糖尿病主要死因之一[1]。糖尿病肾病起病隐匿，在早期很少有临床症状，一旦出现临床症状，尿中将存在明显而且持续的蛋白，就会慢慢演变为肾衰竭[2]。因此在糖尿病早期对其诊断并及时干预治疗，可以减缓肾功能减退，改善预后，提高人们的生活质量。现阶段对糖尿病肾病诊断的最可靠的方法依旧是肾脏活检，但是肾脏活检不但对操作者的技术要求高，而且对患者的创伤大，费用也高，临床推广比较困难[3]。常规的实验室检查像尿蛋白定量、肌酐、尿素氮等又很难发现肾脏的早期病变，因此当务之急是寻找一种创伤小、费用低、操作简便的检测方法，来检测肾脏的早期损害。由于肾脏里含有丰富的3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPD）[4]，肾小球肾炎、肾脏衰竭、肾移植排斥反应早期、糖尿病肾病、肾癌等肾脏疾病患者的血浆和尿液中GAPD的活性变化明显，笔者在前期试验中，已经研制出适用于生化分析仪的测定GAPD的动力学方法。现将GAPD活性的检测对肾脏疾病的早期诊断的参考价值报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 对照组 辽宁医学院附属第三医院体检中心健康体检者190名（无心、肝、肾、免疫性疾病、高血压及肿瘤），男132名，女58名，年龄20～70岁。
1.1.2 疾病组 选取辽宁医学院附属三院内分泌科2010年11月～2011年6月住院的2型糖尿病患者80例，男45例，女35例，年龄20～70岁。疾病组入选标准根据1999年糖尿病诊断标准：（1） 糖尿病症状+任意时间血浆葡萄糖水平≥11.1 mmol/L； （2）空腹血浆葡萄糖≥7.0 mmol/L；（3）OGTT试验中2 h血糖≥11.1 mmol/L，在次日复诊仍符合4条标准之一者确诊为DM患者。疾病组排除标准：（1）除外糖尿病酮症，各种急慢性感染性疾病，非糖尿病性肾脏疾患，高血压，肝脏疾病，心力衰竭及其他内分泌代谢疾病，肺间质纤维化，结缔组织疾病及恶性肿瘤；
（2）除外血β2-微球蛋白>6 mg/L。
根据24小时尿白蛋白排泄率（UAER）将疾病组分为3组：（1）正常白蛋白尿组：UAER<20 μg/min；（2）微量白蛋白尿组20 μg/min≤UAER<200 μg/min；（3）大量白蛋白尿组：UAER≥200 μg/min。
1.2 检测试剂和方法
采用日立7600全自动生化分析仪，微量白蛋白检测试剂盒和β2-微球蛋白检测试剂盒购自于宁波瑞源生物科技有限公司，严格按照说明书进行操作。
1.3 统计学处理
采用SPSS17.0软件进行分析，计量资料用（）表示，多组间的差异采用单因素方差分析，相关系数用pearson相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 对照组与疾病组GAPD活性值比较
对照组和疾病组各组的GAPD的活性比较，大量白蛋白尿组中最高。并且随着尿微量白蛋白的增加，血中GAPD的活性也增加。见表1。
2.2 各组尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白及血GAPD比较
测定各组尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白及血GAPD 3个指标，结果见表2。4组血GAPD、尿微量白蛋白尿β2-微球蛋白活性比较：疾病组的GAPD活性水平均高于正常组，差异有统计学意义（P<0.05）。疾病组中的微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组的尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。但是正常白蛋白尿组中的微量白蛋白和尿β2-微球蛋白与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。疾病组各组之间中的GAPD差异无统计学意义（P>0.05）。而微量白蛋白和β2-微球蛋白在各组之间比较差异有统计学意义（P<0.05）。实验表明，GAPG活性比微量白蛋和β2-微球蛋白更早发生变化，在预测糖尿病早期发生肾脏疾病的发生方面更有意义。
根据表2作血GAPD与尿微量白蛋白以及血GAPD与尿β2-微球蛋白的相关性分析。血GAPD与尿微量白之间有直线相关关系，相关系数r=0.843，P<0.01，差异有统计学意义；血GAPD与尿β2-微球蛋白之间有直线相关关系，相关系数r=0.759，P<0.05，差异有统计学意义。
3 讨论
糖尿病肾病是渐进的过程，是糖尿病晚期的并发症之一，多见于病史10年以上的患者[5]。肾小球滤过膜在正常的状态下允许分子量低于7万的物质自由通过；而大分子如微量白蛋白，分子量69 kD并且带负电荷则难以通过。一旦因炎症，免疫性疾病或肿瘤等因素使肾小球滤过膜的完整性受到损害时，尿中微量白蛋白的量就会增加。一些小分子量的球蛋白β2-微球蛋白、α1-微球蛋白，可通过肾小球滤过膜，在近曲肾小管处全部重吸收。肾小管的损伤也会引起此类蛋白在尿液中的含量增加[6]。
1989年Mogensen将糖尿病肾病分为5期。现阶段对早期糖尿病肾病诊断的实验室标准只有尿蛋白排泄率[7]，而像β2-微球蛋白、α1-微球蛋白、尿酶等并未广泛应用于临床[8-9]。研究表明，许多2型糖尿病患者在蛋白尿出现之前肾脏结构就已经发生变化[10]。2型糖尿病患者的死因多为心血管疾病，也就中断糖尿病肾病的转化过程[11]，使得微量白蛋白对糖尿病肾病的预测价值受到了一定的影响。有些学者研究发现尿蛋白正常的糖尿病患者运动后，β2-微球蛋白的水平高于对照组；而且β2-微球蛋白常随着时间推移和温度的变化而降解，特别是在酸性环境下[7]。因此要准确的测定β2-微球蛋白除了留取样本后立即送检之外，而且还要提前碱化尿液。这对临床各方面的要求更加严格，同时也限制在临床方面的应用。
研究发现，疾病组中微量白蛋白组和大量白蛋白组中的尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白已经明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），证明此时的受检者的肾小球和肾小管都有损伤。正常白蛋白尿组中的尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05），而正常白蛋白尿组中的GAPD与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05），说明糖尿病患者在尿微量白蛋白正常时就已经发生改变。微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组的GAPD也明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。而且随着尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白的增加，血GAPD的活性水平也增加。通过线性分析，血GAPD与尿微量白蛋白和β2-微球蛋白具有相关性，与微量白蛋白的相关系数r为0.843，P<0.01；与β2-微球蛋白的相关系数r为0.759，P<0.01，说明随着肾小球和肾小管进一步的损伤，GAPD的活性也进一步增加。由此可以发现，糖尿病肾病患者的GAPD的活性水平随着肾脏功能的减弱而增加，而且在尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白出现之前就已经发生改变，比这两个指标更早的预测肾脏疾病的发生，由此临床可以在肾脏疾病发生的早期进行干预治疗。
[参考文献]
[1] Wouter B.A，Eijkelkamp，Zhongxin Zhang，et al.Albuminuria is a target for renoprotective therapy independent from blood pressure in patients with type 2 diabetic nephropathy： post hoc analysis from the reduction of endpoints in niddm with the angiotensin ii antagonist losartan（renaal） trial[J].Journal of the American Society of Nephrology，2007，18（5）：1540-1547.
[2] Dick de Zeeuw，Giuseppe Remuzzi，Hans-Heik Parving，et al.Albuminuria，a therapeutic target for cardiovascular protection in type 2 diabetic patients with nephropathy[J].Circulation，2004，110（8）：921-927.
[3] Haider DG，Peric S，Friedl A，et al.Kidney biopsy in patients with diabetes mellitus[J].Clinical nephrology，2011，76（3）：180-185.
[4] Ya Su，Katherine G，Blake-Palmer，et al.Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase is required for band 3 （anion exchanger 1）membrane residency in the mammalian kidney[J].Am J Physiol Renal Physiol，2011，300（1）：157-166.
[5] 李保春，许静，袁伟杰.2型糖尿病性肾病[M].上海：第二军医大学出版社，2003：1-11.
[6] 周新，府伟灵.临床生物化学与检验[M].北京：人民卫生出版社，2007：207-230.
[7] 李保春，王林辉，梅小斌.糖尿病性肾病[M].上海：第二军医大学出版社，2004：1-60.
[8] Argilés À，Mourad G，Gouin-Charnet A，et al.Antiproteases and cells in the pathogenesis of β2-microglobulin amyloidosis：role of α2-macroglobulin and macrophages[J].Nephron，2000，86（1）：1-11.
[9] 雷厉.相关肾脏早期损害指标对早期糖尿病肾病的诊断价值[J].热带医学杂志，2006，6（8）：942-943.
[10] 王梅，林晓明，王海燕等.早期糖尿病肾病的病理形态学变化讨论[J].中国实用内科杂志，2002，22（8）：490-491.
[11] Suma Dronavalli，Irena Duka，George L Bakris.The pathogenesis of diabetic nephropathy[J].Nature Clinical Practice，2008，4（8）：444-452.
（收稿日期：2012-09-19）