打开文本图片集
【摘 要】采用烘干法和冻干法对细菌进行干燥至恒重，测定细菌浓度，比较两者差异，筛选出适合不同实验需要的理想方法。
【关键词】干燥失重；细菌浓度；冷冻干燥
细菌的基本形态有球形、杆形、螺旋形等，大小以微米计，直径一般为0.5～1微米。细菌浓度在细菌的研究和生产中，经常需要测定培养液的细菌浓度，测定细菌浓度的方法有很多，比如重量法、平板计数法、比浊法、电导率法等。其中重量法精确度高，重现性好，是精确分析细菌浓度的经典方法。而测定菌体重量又可以使用烘干法干燥和低温冷冻干燥两种方法，二者主要是干燥菌体的温度不同。文章着重分析在液体培养基中细菌用两种方法测定的菌体浓度是否有所差别，以及哪种方法更适合我们研究需要。
一、实验材料
（一）实验仪器及材料
电子天平：MS205，METTLER TQLEDO
真空冷冻干燥机：minifast04，MBE5070，东富龙
离心机：低速自动平衡型，LDZ4-1.2
电热恒温干燥箱：GZX-DH202，上海精密仪器仪表厂
发酵液：流行性脑膜炎球菌
以上材料均由成都康华生物制品有限公司提供
（二）菌液的制备
由于流行性脑膜炎球菌属于乙类传染病原，所以使用之前需要先做灭活处理。取流行性脑膜炎球菌发酵液200ml，加入甲醛溶液2ml，混合搅拌三十分钟杀菌。
二、实验方法
（一）烘干法测菌浓
将五只离心试管置于干燥箱中烘干至恒重，自然冷却后用电子天平称其重量。分别准确量取10ml制备好的发酵液，分别加入准备好的五支离心试管中，送入离心机进行离心（3500rpm，10min），倒去上清液，加入无菌注射用水，再次离心，倒去上清液，将菌体送至电热恒温干燥箱烘干至恒重（105℃，12h），自然冷却后取出称重，利用差量法求得发酵液中菌体浓度。
（二）低温冷冻干燥法测菌浓
将五只离心试管置于干燥箱中烘干至恒重，自然冷却后用电子天平称其重量。分别准确量取10ml制备好的发酵液，分别加入准备好的五支离心试管中，送入离心机进行离心（3500rpm，10min），倒去上清液，加入无菌注射用水，再次离心，倒去上清液，将菌体送至真空冷冻干燥机干燥至恒重（-70℃～30℃，40h），取出称重，利用差量法求得发酵液中菌体浓度。
三、结果
四、结语
从实验结果不难看出，用真空冷冻干燥法和烘干法测得的同一批菌体浓度，偏差达到了15﹪，而且真空冷冻干燥法测得的菌浓要明显高于用烘干法测得的菌浓。这是因为细胞的含水量包括了自由水和结合水，烘干法使两者都得到蒸发，细胞活性丧失；而真空冷冻干燥，只使细菌失去细胞内的自由水，可以完整的保存细胞的生物活性，所以使用真空冷冻干燥法测量细菌的浓度要高于烘干法测量的细菌浓度。那么我们在科研和生产中应该使用这两种方法中的哪一种更科学呢？我们可以看到用真空冷冻干燥法测得的菌体浓度标准偏差要小于用烘干法测得的菌体浓度偏差，这说明真空冷冻干燥法的稳定性高于烘干法，但两者相差不大。但是我们在平时的科研和生产中，特别是细菌的发酵过程中需要检测活菌的生长情况，其中的菌体浓度又是重要指标之一，那么我们用真空冷冻干燥法测得的菌体浓度，更接近于活菌的实际浓度值，而用烘干法测得的菌体浓度值是菌体干重，肯定会低于活菌的实际浓度值。并且，微生物细菌大多为活性物质，高温下会降解。所以作者认为，在实际的科研和生产中，如果条件允许的话，真空冷冻干燥法测定菌体浓度较烘干法更加科学、精确。
参考文献
[1] 孙悦迎.食品微生物[M].北京：中国商业出版社，1991.
[2] 牛天贵.食品微生物学实验技术[M].北京：中国农业大学出版社，2002.
[3] 范秀容，微生物学实验[M].北京：人民教育出版社， 1980：65-67.
[4] 周德庆，微生物学实验手册[M].上海：上海科学技术出版社，1986：85-86.